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雞傳染性支氣管炎抗體ELISA試劑盒說明書
更新時間:2012-07-18 點擊量:1147

雞傳染性支氣管炎抗體ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定雞血清,血漿及相關液體樣本中傳染性支氣管炎抗體水平。高品質ELISA試劑盒供應商,品質,售后完善。歡迎垂詢,并提供免費代檢測服務。

實驗原理

  本試劑盒用雙抗夾心酶聯免疫ELISA測定標本傳染性支氣管炎抗體。用純化的傳染性支氣管炎抗原包被微孔板,制成固相抗可與樣品中傳染性支氣管炎抗體相結合經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的傳染性支氣管炎抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中傳染性支氣管炎抗體的存在與否。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1

1

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

陰性對照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

陽性對照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.15

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.20

  陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為傳染性支氣管炎抗體陰性

  陽性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為傳染性支氣管炎抗體陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

公司專業銷售各種品牌價格檔次的ELISA試劑盒。服務于高校及免疫學科研單位。*,售后服務完善。并可以免費代檢測,更好的為您服務。

滬公網安備 31011802001677號

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